PCR Master Mix
2×Taq PCR MasterMix
PBZ0111-1 1ml 150.00 含染料
PBZ0111-2 1ml 150.00 不含染料
简介
本产品包含Taq DNA聚合酶、dNTP和优化的反应缓冲液，浓度为2×。该制品具有强的扩增能力。DNA扩增时，只需加入模板，引物和水，使Taq PCR MasterMix溶液的浓度为1×即可进行反应。具有快速、灵敏度高、特异性强、稳定性好等优点。进行PCR扩增可以减少操作时间，避免因多步操作带来的污染，特别适宜高通量筛选基因的扩增，其扩增产物3′ 端带“A” 碱基。扩增产物可以直接上样电泳。
试剂组成
PBZ0111-1 2xTaq PCR Master Mix（含红色染料） 1ml 灭菌ddH2O 1.2ml
PBZ0111-2 2xTaq PCR Master Mix（不含染料） 1ml 灭菌ddH2O 1.2ml
保存条件及有效期
-20℃，有效期6个月。避免反复冻融，以免影响扩增效果。 为保证扩增效果，建议分装成小量使用。
产品组成
50mmol/LTrisHCl，20mmol/LKCl，0.08U/μl Taq DNA polymerase，4mmol/LMgCl2，500μmol/L dNTPs，稳定剂及红色染料。
以25μl反应体系为例，在一个无菌PCR反应管中加入以下成分
2×Taq PCR MasterMix 12.5μl
上游引物 (10 μmol/L) 1 μl
下游引物 (10μmol/L) 1 μl
模板（基因组0.1-1 μg， 质粒DNA1-10ng） < xμl
加灭菌ddH2O至终体积为 25μl
实际操作中为防止交叉污染计算好需补加水的量后，建议先加水，然后按上述顺序添加其它成分。充分混匀后，离心数秒使反应混合物沉到管底。然后将反应管置于PCR仪中进行扩增。如果需要扩大体系，可以按比例放大。
PCR反应循环条件设置
实验例
在PE9600型PCR仪上，扩增1.0 kb DNA片段的反应循环条件：94℃预变性5 min，然后按照下参数扩增25-35个循环：94℃变性30 sec，42-65℃退火30 sec，72℃延伸1-2 min，完成后，72℃后延伸5-10 min。具体的退火温度由引物的Tm值决定。各个温度持续的时间由扩增产物长度而定。循环数主要取决于起始模板量。Taq DNA polymerase的合成速度较快，每分钟延伸1-2 kb。
结果检测
反应结束后，5μl扩增产物用含0.5μg/ml溴化乙啶（或合适浓度的其它DNA染色试剂），合适浓度的琼脂糖凝胶电泳检测，电泳完成后在紫外透射仪下观察结果。
引物溶解及稀释方法
1. 首先确定引物量：找到合成引物离心管标签上的nmole值（例如其读值为7.82nmols），或OD数（先算出OD和μmol转化系数（OD/μmol）＝（ #A×15.3）+（#T×9.3）＋（#C×7.4）＋（#G×11.8）。例：一条长22个核苷酸的引物其中有8个A，4个T，5个C和5个G。算的转化系数为255.6，那么每个OD的nmole值为3.91，合成量为2.0OD，该次合成量为7.82nmole。）
2. 引物储存液：建议您将引物储存液浓度配制为100μmol/L，那么溶解引物所需加入无菌水或TE的量7.82×10=78.2μl。
3. 引物工作液：根据储存液浓度稀释配制到您所需要的浓度即可。
小建议
用质粒为模板来扩增DNA时，为了*大限度地降低突变，可以采用高浓度模板和低循环数的策略，再用凝胶回收片断。
