PCR聚合酶
Taq DNA polymerase 浓度2 U/μl
PBZ0101-1 200 U 40.00
PBZ0101-2 1,000 U 150.00
PBZ0101-3 10,000 U 1200.00
产品描述：
Taq DNA polymerase是Thermus aquaticus菌中的热稳定性polymerase，分子量大约为94kDa。在70－80℃，镁离子存在的条件下，该酶可催化三磷酸脱氧核苷酸沿5’→3’方向发生聚合反应，合成DNA。它具有5’→3’外切酶活性，具有切口平移特性。Taq DNA polymerase还具有模板非依赖性的末端转移酶活性，可在聚合反应结束后在产物两端的3’上再添加一个脱氧核苷。该活性中由于酶对dATP的利用较其余三种三磷酸脱氧核苷酸为高，使得大部分PCR产物两边的3’端各多加一个A碱基。使用本酶扩增的产物可以进行TA克隆。Taq DNA polymerase 适用于常规的PCR扩增，real-time PCR，引物延伸，DNA序列测定，同位素和非同位素的DNA标记，具有3’-OH的平末端DNA片段加A反应等。
质量检测分析：
除Taq DNA polymerase特有的酶活性外，未检测到外源核酸酶活性；SDS-PAGE及考马斯亮蓝R250染色分析酶蛋白纯度在95％以上；30℃存放一周酶活性无明显下降；能有效扩增人基因组中的单拷贝基因。
酶贮存液组分：
50mM Tris-HCl (pH 8.2 at 25°C)，100mM NaCl，0.1mM EDTA，1mM DTT，50% glycerol。
10×PCR Buffer：200mM Tris-HCl (pH 8.8 at 25°C)，100mM KCl，100mM (NH4)2SO4，15mM MgCl2，1.0% Triton® X-100。可以提供不含MgCl2的10×PCR Buffer及单独的50mM浓度的MgCl2。
保存条件及有效期：
-20℃ 保存，有效期12个月。
来源：重组taq 基因的大肠杆菌中表达并纯化的酶蛋白。
活性定义：在74℃条件下，30 min内催化10 nmol dNTPs掺入反应成为酸不溶性物质所需的酶量定义为一个活性单位。
注意事项：
10×PCR Buffer冷冻后，Mg2＋会形成一个浓度梯度，使用时应该完全化冻并混匀，离心后再使用。
反应实验例：
1. 在一个无菌PCR反应管中加入以下成分
成分名称 加入量 成分终浓度
10×PCR Buffer with MgCl2 5 μl 1×
dNTPs, 10mM each 1 μl 200μM each
上游引物 5–50 pmol 0.1–1.0 μM
下游引物 5–50 pmol 0.1–1.0 μM
DNA template variable <0.5 μg/50 μl
Taq DNA polymerase (2U/μl) 1μl 2 U/50 μl
用高压灭菌双蒸水补至终体积50 μl。实际操作中计算好需补加水的量后，建议先加水，然后按上述顺序添加其它成分。充分混匀后，离心数秒使反应混合物沉到管底。然后将反应管置于PCR仪中进行扩增。
2. PCR反应循环条件设置
在PE9600型PCR仪上，扩增1.0 kb DNA片段的反应循环条件：94℃预变性5 min，然后按照下参数扩增25-35个循环：94℃变性30 sec，42-65℃退火30 sec，72℃延伸1-2 min，完成后，72℃后延伸5-10 min。具体的退火温度由引物的Tm值决定。各个温度持续的时间由扩增产物长度而定。循环数主要取决于起始模板量。Taq DNA polymerase的合成速度较快，每分钟延伸1-2 kb。
3. 结果检测
反应结束后，5μl扩增产物用含0.5μg/ml溴化乙啶（或合适浓度的其它DNA染色试剂），合适浓度的琼脂糖凝胶电泳检测，电泳完成后在紫外透射仪下观察结果。
