Folin-Phenol   福林酚 (乙试剂)

PB10304    newprobe 50ml 68.00

产品说明  用于蛋白质定量

测定原理：

Folin-酚试剂法（Lowry法）测定蛋白浓度包括两步反应：**步是在碱性条件下，蛋白质与铜作用生成蛋白质-铜络合物；第二步是此络合物将磷钼酸-磷钨酸试剂（Folin试剂）还原，产生深蓝色（磷钼蓝和磷钨蓝混合物），颜色深浅与蛋白质含量成正比。此法操作简便，灵敏度比双缩脲法高100倍，定量范围为20-250μg蛋白质。含有酚基的氨基酸（酪氨酸、色氨酸、苯丙氨酸）能与Folin-酚试剂反应呈蓝色，因此样品中若含有酚类、柠檬酸和巯基化合物均有干扰作用。此外，不同蛋白质因酪氨酸、色氨酸含量不同而使显色强度稍有不同。此法也适用于酪氨酸和色氨酸的定量测定。

Folin-酚试剂的配制

          1.Folin-酚试剂甲：

将1g Na₂CO₃溶于50mL 0.2mol/L NaOH中。把0.5g五水合硫酸铜（CuSO₄.5H₂O）溶于100mL 1%酒石酸钾钠（KNaC₄H₄O₆）或酒石酸钠（Na₂C₄H₄O₆）溶液。然后将前者50mL与后者1mL混合，此试剂只能用一天，过期失效。该试剂由使用者配制。
2.Folin-酚试剂乙：

    提供的Folin-酚试剂乙原液浓度为2mol/L，使用前需用去离子水稀释一倍，使其*终浓度为1mol/L。根据实验所需量进行稀释。稀释完的液体为Folin-酚试剂乙工作液。Folin-酚试剂乙原液平时应密封贮存于4℃冰箱中避光保存。

操作方法：

    1）标准曲线的制度：

取14支试管分成两组，分别加入0﹑0.1﹑0.2﹑0.4﹑0.6﹑0.8﹑1.0mL标准蛋白质溶液（推荐用结晶牛血清白蛋白或酪蛋白，配成250mg/mL），用去离子水补足到1mL，加入5mL试剂甲，混匀，于20-25℃放置10分钟。再加入0.5mLFolin-酚试剂乙工作液，立即摇匀，在20-25℃保温30分钟。于分光光度计上500nm处下测定各试管中溶液的光密度并记录结果。取两组测定的平均值，以蛋白质浓度为横座标，光密度值为纵座标，绘制标准曲线。

    2）样品测定：

取1mL样品溶液（约合20-250μg多肽或蛋白质）加入5mL试剂甲混匀，于20-25℃保温30分钟，再加0.5mL试剂乙工作液，立即摇匀，在20-25℃保温30分钟。然后于500nm处比色，以1mL水代替样品作空白对照。测定后，对照标准曲线，计算出未知样品的浓度。

若用0.5cm光程的比色杯进行比色，可按下面方法进行操作：取0.2mL样品溶液（约含5-100μg多肽或蛋白质），加入1mL试剂甲（可选用0.3-0.5cm直径的小试管）混匀，10分钟以后，再加入0.1mL试剂乙工作液，立即混匀，30分钟后比色。一般来说，若多肽或蛋白质浓度在2-25μg之间，测量波长设为755nm。而25μg以上则采用500nm比色为宜。

注意事项：

1. 进行测定时，加Folin试剂要特别小心，因为Folin试剂仅在酸性pH条件下稳定，但此实验的反应只是在pH10的情况下发生，所以当加试剂乙（Folin试剂）时，必须立即混匀，以便在磷钼酸-磷钨酸试剂被破坏之前即能发生还原反应，否则会使显色程度减弱。

2. 测定未知蛋白质样品的稀释的倍数应使蛋白质含量在标准曲线范围之内，若超过此范围则需将样品酌情稀释。